免疫荧光组化分析等实验服务竞价公告-CF105902022000945_招标网

免疫荧光组化分析等实验服务竞价公告-CF105902022000945

信息发布日期：2022.09.16 标签：广东省招标

招标编号：	CF105902022000945
加入日期：	2022.09.16
截止日期：	2022.09.24
招标业主：	深圳大学
地区：	广东省
内容：	基本信息：发布时间：**-- :: 截止时间：**-- :: 申购单号：*************** 申购主题：免疫荧光组化分析等实验服务采购单位：** 报价要求：国产含税发票类型：增值税专用发票币种：人民币预算：付款方式：货到验

招标公告正文

基本信息：

发布时间：2022-09-16 10:34:37

截止时间：2022-09-24 12:00:00

申购单号：CF105902022000945

申购主题：免疫荧光组化分析等实验服务

采购单位：深圳大学

报价要求：国产含税

发票类型：增值税专用发票

币种：人民币

预算：

付款方式：货到验收合格后付款

备注说明：

签约时间：发布竞价结果后5天内签约合同

送货时间：发布竞价结果后5天内送达

安装要求：免费上门安装（含材料费）

收货地址：***

申购明细：

采购内容	数量	单位	预算单价	品牌	型号	规格参数	质保及售后服务
免疫荧光组化分析等实验服务	100		500			1.1 实验方法免疫荧光（双标，组织芯片）依次将切片放入环保型脱蜡液I 10min-环保型脱蜡液II 10min-环保型脱蜡液III 10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-无水乙醇Ⅲ5min-蒸馏水洗。抗原修复：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8min停火8min转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定）画圈,双氧水封闭：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育25 min，封闭内源性的过氧化物酶，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。血清封闭: 甩干PBS, 滴加BSA，封闭30min。（一抗是山羊来源用10%兔血清封闭，一抗其它来源的用3%BSA封闭）加第一种一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）加对应的HRP标记的二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的HRP标记的二抗覆盖组织，室温孵育50min。加CY3-TSA（或FITC-TSA）：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加TSA，避光室温孵育10min. 孵育完后，玻片置于TBST中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min微波处理：组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8）的修复盒中于微波炉内加热处理，中火8min停火8min转中低火7min，去掉已经结合到组织上的一抗二抗，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。加第二种一抗：在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。加对应的二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的荧光二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。 DAPI复染细胞核：切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。自发荧光淬灭：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后，在圈内加入自发荧光淬灭剂5min，流水冲洗10min。封片：切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。免疫组化（组织芯片）石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入脱蜡液Ⅰ 15min-脱蜡液Ⅱ 15min-脱蜡液III 15min-无水乙醇Ⅰ 5min-无水乙醇Ⅱ 5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复缓冲液（PH6）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min至沸，停火8min保温再转中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。阻断内源性过氧化物酶：切片放入3%双氧水溶液，室温避光孵育25 min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。（一抗是山羊来源的用兔血清封闭，其他来源的用BSA封闭）加一抗：轻轻甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗（HRP标记）覆盖组织，室温孵育50min。 DAB显色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，自来水冲洗切片终止显色。复染细胞核：苏木素复染3min左右，自来水洗，苏木素分化液分化数秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝，流水冲洗。脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min--85%酒精5min --无水乙醇Ⅰ 5min --无水乙醇Ⅱ 5min--正丁醇5min--二甲苯Ⅰ 5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，封片胶封片。显微镜镜检，图像采集分析。荧光分析（组织芯片数字扫描）通过扫描浏览软件（3DHISTECH（Hungary） CaseViewer2.4）对其进行AI分析得到阳性面积，阳性率等相关芯片组化数据组化分析（组织芯片数字扫描）通过扫描浏览软件（3DHISTECH（Hungary） CaseViewer2.4）对其进行AI分析得到MVP，H-Score等相关芯片荧光数据透射电镜全套取材固定：新鲜组织确定取材部位，尽量减小牵拉、挫伤与挤压等机械损伤，1-3min内取样，取样组织1mm3大小。取材前可提前准备装有电镜固定液的培养皿，将小组织块离体取下后立即投入培养皿内，用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成1mm3的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的电镜固定液的EP管内继续固定，4℃固定保存及运输。0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。后固定：0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）配制的1%锇酸避光室温固定2h。0.1M磷酸缓冲液PB（PH7.4）漂洗3次，每次15min。室温脱水：组织依次入30%-50%-70%-80%-95%-100%-100%酒精上行脱水每次20min，100%丙酮两次，每次15min。渗透包埋：丙酮︰812包埋剂=1︰1 37℃ 2-4h，丙酮︰812包埋剂=1︰2 37℃渗透过夜，纯812包埋剂37℃ 5-8h。将纯812包埋剂倒入包埋板，将样品插入包埋板后37℃烤箱过夜。聚合：包埋板放于60℃烤箱聚合48h，取出树脂块备用。超薄切片：树脂块于超薄切片机60-80nm超薄切片，150目方华膜铜网捞片。染色：铜网于2%醋酸铀饱和酒精溶液避光染色8min；70%酒精清洗3次；超纯水清洗3次；2.6%枸橼酸铅溶液避二氧化碳染色8min；超纯水清洗3次，滤纸稍吸干。铜网切片放入铜网盒内室温干燥过夜。透射电子显微镜下观察，采集图像分析。 1.2 实验要求实验前和实验后实验员需全程跟踪，以保证实验结果客观。 1.3 实验操作人员要求实验前核对样品数量及编号。实验时及时汇报实验中段意外，及时反馈。未汇报则视为一切正常。试验后核对数据，及时反馈问题。 1.4 数据处理及资料保存为保证项目委托方图片及数据结果电子文档进行安全备份。项目资料如无特殊需求自项目结题后保存6个月或新一年初进行清理。	按行业标准提供服务

报价地址：***

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